EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞處理方法:

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。**續(xù)寫內(nèi)容：**

7. 傳代操作注意事項：
- 貼壁細(xì)胞：吸棄舊培養(yǎng)基，用無菌PBS輕柔洗滌細(xì)胞1-2次，以去除殘留血清和代謝廢物。加入適量胰蛋白酶消化液（如0.25%胰酶-EDTA），覆蓋瓶底即可，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化1-2分鐘。顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓后，輕拍瓶壁促使細(xì)胞脫落，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。吹打形成單細(xì)胞懸液后，按比例分裝至新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基。
- 懸浮細(xì)胞：若需擴(kuò)大培養(yǎng)，可按1:2至1:3的比例分裝，確保細(xì)胞密度適宜。傳代時避免過度吹打，以免機(jī)械損傷細(xì)胞。

8. 凍存與復(fù)蘇：
- 凍存：選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞，離心后重懸于預(yù)冷的凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），分裝至凍存管，標(biāo)注細(xì)胞名稱、代次及日期。采用程序降溫盒或分步降溫法（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時→-80℃過夜），最后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
- 復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，迅速置于37℃水浴中搖晃至融化，用培養(yǎng)基稀釋后離心去除DMSO，重懸接種至培養(yǎng)瓶，24小時后更換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞碎片。

9. 質(zhì)量控制：
- 定期檢測支原體污染（如PCR或Hoechst染色），確保細(xì)胞無菌。
- 觀察細(xì)胞形態(tài)是否均一，若出現(xiàn)異常增殖或空泡化，需排查培養(yǎng)條件或重新保種。

10. 應(yīng)用提示：
- EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞可用于抗體生產(chǎn)、免疫學(xué)研究等實驗，傳代時建議保持密度在1×10^6/mL左右，避免過度稀釋導(dǎo)致生長停滯。
- 若細(xì)胞狀態(tài)不佳，可嘗試調(diào)整血清濃度（如15%-20%）或添加IL-4等細(xì)胞因子增強(qiáng)活力。