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急性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　急性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:TALL-104

形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:IMDM:Iscove＇sModiefiedDulbecco＇sMedium20%FBS　

傳代方法:維持細(xì)胞密度在4×105~1×106cells/ml之間，2~3天換液1次　

生長特性:懸浮生長　

存儲(chǔ)條件:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是急性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
左西孟旦Levosimendan質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR  人幾丁質(zhì)酶1(殼三糖酶)(CHIT1)試劑盒 Human chitinase 1 (chitoiosidase),CHIT1 ELISA kit  人神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

鋅試劑on質(zhì)量規(guī)格：AR  Ratbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  小鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒 Mouse inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA KIT

試劑Dithizone質(zhì)量規(guī)格：AR  10倍TPE分子生物級(jí)濃縮緩沖溶液500毫升  牛結(jié)核桿菌(TB)核酸檢測(cè)試劑盒 48T

鎂試劑IMagnesonI質(zhì)量規(guī)格：AR  MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISA試劑盒小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISA試劑盒人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP2 ELISA Kit  36052-37-6山姜素規(guī)格  Alpinetin

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA檢測(cè)試劑盒Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  19309-14-9小豆蔻明   Cardamonin

犬*甘油三酯脂酶(PNLIP)試劑盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit  24502-78-1乙酰紫草素說明書  Acetylshikonin 

英文名稱MouseAβ1-40proteinELISAKit小鼠Aβ1-40蛋白規(guī)格：96T/48T  34157-83-0雷公藤紅素品牌  Celastrol

同酸待測(cè)樣品處理試劑盒20  69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉規(guī)格  Sulfotanshinone  Injection
黃芪總皂苷規(guī)格  Astragaloside   組織尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量檢測(cè)試劑盒50

換規(guī)格換規(guī)格品牌  換規(guī)格   組織尿酸含量酶偶聯(lián)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

槐角堿說明書    組織尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒20

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷   Quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden   組織尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

廣藿香酮規(guī)格  Pogostone   組織尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20
急性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)MousesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  芹菜素-7-O-槐糖苷規(guī)格  Apigenin-7-O-β-D-sophoroside 

小鼠左右決定因子2(LEFTY2)ELISA試劑盒 ，英文名： LEFTY2 ELISA Kit  7014-39-3新異甘草苷   Neoisoliquiritin

鴨白介素2(IL-2)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerleukin2,IL-2ELISAkit 96T/48T  23696-85-7突厥烯酮品牌  Damascenone 

犬誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒 Dog inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA Kit  5471-51-2覆盆子酮規(guī)格  4-(4-hydroxyphenyl)-2-butanone 

英文名稱MouseCXCL12ELISAKit小鼠B-細(xì)胞趨化因子12(CXCL12)規(guī)格：96T/48T  602-41-5硫秋水仙苷   Thiocolchicoside
收到急性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。