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| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 保存條件 | 低溫冷藏 |
| 品牌 | 莼試 |
| 貨號 | CS-E10341 |
| 用途 | 僅用于科研 |
| 檢測方法 | 詳見說明書 |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 詳見說明書 |
| 適應(yīng)物種 | 詳見說明書 |
| 檢測限 | 0.25ng/mL~8ng/mL |
| 數(shù)量 | 46 |
| 包裝規(guī)格 | 詳見說明書 |
| 標記物 | 詳見說明書 |
| 純度 | 98% |
| 樣本 | methotrexate |
| 應(yīng)用 | 詳見說明書 |
| 是否進口 | 是 |
試劑盒性能:
人甲胺喋呤ELISA試劑盒 準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
靈敏度:*檢測濃度小于0.1 pg/mL。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。
貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
有效期:6個月

產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 檢測范圍 |
人甲胺喋呤ELISA試劑盒 | methotrexate | 0.25ng/mL~8ng/mL |
自備物品:
酶標儀(450nm)
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
自備的設(shè)備及試劑:
1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2. 單道或多道微量加液器及吸頭
3. 稀釋樣品的EP管
4. 蒸餾水或去離子水
5. 吸水紙
6. 盛放洗液的容器
| 雙抗體夾心法(檢測未知抗原) | 間接法(檢測未知抗體) |
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。 2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 3、加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。 4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 | 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照) 3、加酶標抗體:于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標*抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*一遍用DDW洗滌。 4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性 |
樣品收集、處理及保存方法:
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作流程如下:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl?!?/span>
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!?/span>
(6)洗板,同(4)?!?/span>
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl?!?/span>
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)?!?/span>
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min?!?/span>
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)?!?/span>
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
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