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封閉毛細(xì)線蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒注意事項(xiàng)

發(fā)表時(shí)間:2023-11-13
封閉毛細(xì)線蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用.

測(cè)定意義

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測(cè)吸光值,從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,從而檢測(cè)NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

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