蛋白磷酸酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體
內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體
結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體
真核翻譯起始因子1抗體
上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體
T細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體
電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白脫氫酶抗體
EGF毒素受體7跨膜結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
乙醇胺激酶2抗體
磷酸化Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體
磷酸化上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體
嗜酸性粒細(xì)胞過氧化物酶抗體
核酸內(nèi)切酶G抗體
酪氨酸蛋白激酶受體A10抗體
胞吐囊復(fù)合體蛋白2抗體
磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
泛素交聯(lián)酶抗體
EB病毒核抗原抗體-3B抗體
